Fuente: Revista Colombiana de Ciencias Hortícolas ABSTRACT Nitrogen (N) is essential for amino acid synthesis in rice production, but its excessive use poses an environmental concern. This research aimed to improve rice agronomic nitrogen use efficiency (ANUE) by knockout (KO) of rice homologs of the two selected genes from Arabidopsis thaliana: AtAAP2, an amino acid permease involved in N transportation in shoots, and AtCRF4, a transcription factor participating in N uptake in roots. The homologs of these genes in rice were identified based on amino acid sequence similarity and knocked out using CRISPR/Cas9 mediated gene editing (GE). The AAP2-KO and CRF4-KO lines were subjected to agronomic evaluations with three N doses: 100% (180 kg ha-1), 50% (90 kg ha-1), and 0% (0 kg ha-1) and showed a 130-175% increase in dry biomass weight and a 183-313% increase in panicle number compared to wild type (WT) in the first experiment. These lines also had slower leaf senescence, the so-called “stay-green” trait, indicating the KO effect of target genes in N metabolism. However, neither AAP2-KO nor CRF4-KO showed better yield or ANUE than WT. This study demonstrated the usefulness of GE technology in gene evaluation and highlighted the effects of AtAAP2 and AtCRF4 genes in the plant N cycle.RESUMEN El nitrógeno (N) es esencial para la síntesis de aminoácidos en la producción de arroz, pero su uso excesivo plantea una preocupación ambiental. Esta investigación tuvo como objetivo mejorar la eficiencia agronómica del uso del nitrógeno (ANUE) en el arroz mediante “knockout (KO)” de homólogos en arroz de los dos genes seleccionados de Arabidopsis thaliana: AtAAP2, una permeasa de aminoácidos involucrada en el transporte de N en los brotes, y AtCRF4, un factor de transcripción que participa en la absorción de N en las raíces. Los homólogos de estos genes en el arroz se identificaron por la similitud de la secuencia de aminoácidos y se desactivaron mediante la edición genética (GE) mediada por CRISPR/Cas9. Las líneas AAP2-KO y CRF4-KO fueron sometidas a evaluaciones agronómicas con tres dosis de N: 100% (180 kg ha-1), 50% (90 kg ha-1) y 0% (0 kg ha-1) y mostraron un aumento de 130-175% en peso de biomasa seca y un aumento de 183-313% en número de panículas en comparación con el control (WT) en el primer experimento. Estas líneas también tenían una senescencia foliar más lenta, el denominado rasgo de "permanecer verde", lo que indica el efecto de desactivación de genes del objetivo en el metabolismo del N. Sin embargo, ni AAP2-KO ni CRF4-KO mostraron mejor rendimiento o ANUE que WT. Este estudio demostró la utilidad de la tecnología de edición genética en la evaluación de genes y destacó los efectos de los genes AtAAP2 y AtCRF4 en el ciclo del N de la planta.